影片延续前作剧情，故事从“小丑”亚瑟（华金·菲尼克斯 饰）被捕后展开，他在狱中等待着审判日的到来。然而，就在亚瑟与自己的双重人格缠斗之时，他不仅偶遇真爱，甚至还释放出一直潜藏在内心的旋律。

哈莉·奎茵刚刚结束了与小丑的感情。回到哥谭市之后，哈莉·奎茵遇到一个名叫卡桑德拉·凯恩的年轻女孩，她手上有一块属于黑帮老大罗曼·西恩尼斯的罕见钻石，罗曼·西恩尼斯不惜一切代价要夺回这块钻石，并派出了疯狂的连环杀手维克多·扎斯去杀掉卡桑德拉·凯恩。现在，哈莉·奎茵必须与拥有超能力的歌手黑金丝雀、街头义警女猎手、以及哥谭市警局探员芮妮·蒙托亚一起联手阻止西恩尼斯和他的手下，拯救卡桑德拉·凯恩。

年轻大胆的哈莉叶一心想成为一个间谍，她总是带著一本秘密的笔记本，观察邻居们的一举一动，带著小猫的男人、住在怪异花园中的女人、甚至中国餐厅中发生的任何一点小事，都是她记录的对象。但是，哈莉叶的好奇心却过了头，因为她竟然开始撰写父母与同学的行动。一日，同学们发现了茱莉叶的这本秘密笔记，于是决定展开「反间谍行动」，这使得茱莉叶也开始复仇计划。